Skip to content

Komórki zrębowe raka piersi z mutacjami TP53 i przerzutami do węzłów chłonnych ad

2 miesiące ago

468 words

W obu grupach kryteria włączenia stanowiły patologiczną diagnozę inwazyjnego raka przewodowego. Wykluczyliśmy pacjentów z chorobą o dużym stopniu przerzutów, aby zminimalizować niekompletne stwierdzenie z powodu trudności z uzyskaniem pierwotnego pierwotnego raka, na którym przeprowadzono wszystkie analizy. Pacjenci z dziedzicznym rakiem piersi musieli spełniać kliniczne kryteria diagnostyczne18 i mieć szkodliwe mutacje w linii zarodkowej lub niesklasyfikowane warianty BRCA1 lub BRCA2. Dwóch pacjentów, których nowotwory były typu dzikiego dla obu genów, włączono do grupy dziedzicznej, ponieważ byli członkami rodzin z wysokim poprzednim prawdopodobieństwem posiadania mutacji BRCA1 lub BRCA2.
Instytucjonalna komisja rewizyjna w każdej uczestniczącej instytucji zatwierdziła badanie. Wykorzystaliśmy anonimowe próbki powiązane wyłącznie z danymi kliniczno-patologicznymi. Analizy przeprowadzono od września 2005 r. Do maja 2007 r.
Laserowa mikrodyssekcja i ekstrakcja DNA
Mikrodyssekcję metodą laserową przeprowadzono przy użyciu mikroskopu Arcturus PixCell II (Arcturus Engineering) w celu pozyskania nabłonka i zrębu tkanki nowotworowej.19,20 Ten mikroskop wykorzystuje przezroczystą folię termoplastyczną (zwaną również standardową nasadką do mikrodysokacji laserowej) nałożone na powierzchnię odcinka tkanki (o grubości 5 do 7 .m) na standardowych preparatach histopatologicznych. Komórki nabłonka, otaczające komórki zrębowe i prawidłowe komórki w próbce zidentyfikowano i celowano przez mikroskop, z względnie wąskim (15 do 30 .m) impulsem wiązki laserowej dwutlenku węgla. Uzyskana silna adhezja ogniskowa umożliwiła selektywne pobieranie tylko komórek docelowych.
Najpierw usunięto nabłonek nowotworowy, a następnie pobrano fibroblasty do zrębu. Czterech do sześciu standardowych czapek do mikrodyskucji laserem (z 8000 do 9000 komórek na czapkę) pobrano na przedział, cztery z przedziału nabłonkowego i sześć z przedziału podścieliska (ponieważ przedział podścieliska ma niższą gęstość komórkową). Specjalnie wychwyciliśmy fibroblasty podścieliska znajdujące się pomiędzy agregacjami nabłonkowych komórek nowotworowych lub nie więcej niż 0,5 cm od guza nowotworowego. To podejście morfologiczne pozwala na replikację odległości pomiędzy frakcją nowotworowo-zrębową a frakcją nowotworowo-nabłonkową dla wszystkich próbek.
DNA dla każdego nowotworu uzyskano również z leukocytów krwi obwodowej (w 75% z dziedzicznych nowotworów) lub z normalnie pojawiających się komórek, które były oddalone co najmniej cm od guza w sekcji tkanki. Pochodzenie normalnego DNA nie miało wpływu na częstotliwość lub wzór utraty heterozygotyczności lub nierównowagi alleli. Po wykonaniu mikrodyssekcji z wykorzystaniem lasera, genomowe DNA ekstrahowano zgodnie z opisem 19,20
Skanowanie Genomewide
Test PCR-reakcja łańcuchowa (PCR) przeprowadzono na DNA z każdego przedziału (normalnego, nabłonka i zrębu) każdej próbki i z 72 multipleksowych paneli starterowych, zawierających 372 i 386 markery mikrosatelitarne oznaczone fluorescencją dla próbek dziedzicznych i sporadycznych , odpowiednio. Markery te są rozmieszczone w chromosomach od do 22 i X i są oparte na zestawie MapPairs Human Markers, wersja 10 (Invitrogen) opracowanym w Marshfield Institute
[hasła pokrewne: dentus toruń, citodent, duozinal opinie ]

0 thoughts on “Komórki zrębowe raka piersi z mutacjami TP53 i przerzutami do węzłów chłonnych ad”